13個(gè)月發(fā)證：一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法、裝置及應(yīng)用（廣東省中醫(yī)院）

一、發(fā)明專利案件基本信息

技術(shù)領(lǐng)域：生物醫(yī)藥及醫(yī)療技術(shù)

專利號(hào)：CN202110391652.2  

專利名稱：一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法、裝置及應(yīng)用

專利申請日： 2021-04-13

專利授權(quán)日： 2022-05-27

專利申請人：廣東省中醫(yī)院(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院、廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院）

發(fā)明人：陳前軍，張玉柱，梁倩怡，劉曉媛，羅天裕，李華超，張宏艷，盧海，李東梅，許銳，任黎萍

專利代理機(jī)構(gòu)：廣州高炬知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司

專利代理師：孫明科

二、發(fā)明證書

三、發(fā)明專利申請文件信息

申請文件：19頁，9.9萬字，附圖12

授權(quán)權(quán)利要求：9，其中獨(dú)立權(quán)利要求：2

權(quán)項(xiàng)結(jié)構(gòu)樹：

四、合享發(fā)明專利價(jià)值度評(píng)分

五、發(fā)明內(nèi)容摘要：

本發(fā)明公開了一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法、裝置及應(yīng)用，該方法包括如下步驟：將小鼠置于束縛裝置內(nèi)，使其不能動(dòng)作，每天束縛4小時(shí)、維持12小時(shí)的光?暗循環(huán)，共持續(xù)3周或以上時(shí)間，構(gòu)建得到具有抑郁障礙相關(guān)表型的自發(fā)乳腺癌轉(zhuǎn)基因小鼠抑郁障礙動(dòng)物模型。本發(fā)明還公開了其束縛裝置，將該動(dòng)物模型用作模擬人類乳腺癌與抑郁癥過程、及篩選診療藥物或療法。本發(fā)明構(gòu)建的動(dòng)物模型，具有重復(fù)性好、個(gè)體差異小、建模時(shí)間短、動(dòng)物死亡率低等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于模擬人類抑郁癥誘發(fā)乳腺癌及相關(guān)疾病病理和診療物質(zhì)的篩選與療效驗(yàn)證。

六、發(fā)明摘要附圖：

本發(fā)明自發(fā)乳腺癌小鼠11周乳腺組織HE染色結(jié)果照片

七、獨(dú)立權(quán)利要求2項(xiàng)：

1 .一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，其包括如下步驟：

（1）培育5周齡、MMTV?PyMT轉(zhuǎn)基因自發(fā)乳腺癌的小鼠，作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并將其分為對照組、造模組兩組；

（2） 制備使小鼠發(fā)生抑郁癥的束縛裝置；

（3）將造模組小鼠在設(shè)定的障礙條件下飼養(yǎng)：將每只小鼠獨(dú)立裝入到一個(gè)室內(nèi)束縛裝置內(nèi)，通過機(jī)械方式使其身體壓迫在束縛裝置內(nèi)、不能扭頭轉(zhuǎn)身、不能動(dòng)作，每天束縛4小時(shí)，維持12小時(shí)的光?暗循環(huán)，共持續(xù)3周或以上時(shí)間，使其罹患抑郁癥；

對照組小鼠在野外自由環(huán)境下飼養(yǎng)、不被束縛，兩組其他飼養(yǎng)條件均一致；

（4）分別對造模組與對照組小鼠，進(jìn)行動(dòng)物行為和生理組織檢測，是否具備抑郁障礙相關(guān)表型；如造模組小鼠具有抑郁障礙相關(guān)表型，則得到抑郁癥誘發(fā)乳腺癌的動(dòng)物模型。

7 .一種采用權(quán)利要求1～6之一所述方法構(gòu)建的抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的應(yīng)用，其特征在于，將該模型用于檢測乳腺癌與抑郁癥之間發(fā)病及病變過程的關(guān)聯(lián)性實(shí)驗(yàn)。

八、本發(fā)明主要的有益效果：

1）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，采用MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用機(jī)械束縛裝置使其逐步罹患抑郁癥，結(jié)合其自發(fā)乳腺癌轉(zhuǎn)基因，可以較好的實(shí)現(xiàn)模擬人類的抑郁癥誘發(fā)乳腺癌病理發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程的過程。其構(gòu)建的動(dòng)物模型，具有性能穩(wěn)定、可重復(fù)性好、操作便捷、動(dòng)物個(gè)體差異小、造模時(shí)間短、動(dòng)物死亡率低等優(yōu)點(diǎn)。在實(shí)際操作中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)激較小，傷害較小，可以減少外傷對動(dòng)物模擬發(fā)病過程的影響。

2）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，采用的MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因FVB小鼠為原發(fā)性動(dòng)物模型，可模擬原發(fā)性乳腺癌發(fā)病過程，其采用特定的剝離MMTV病毒，導(dǎo)致小鼠乳腺腫瘤的重要病毒的組織特異啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，來介導(dǎo)PyMT癌基因在乳腺中高表達(dá)，從而誘發(fā)乳腺上皮細(xì)胞中PyMT基因的表達(dá)失控，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞的惡性增殖，導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生；其模擬效益優(yōu)于移植性動(dòng)物模型。同時(shí)，FVB小鼠容易焦慮，其自身不容易自發(fā)產(chǎn)生腫瘤。因此，適合于作為本發(fā)明抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建。

3）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇與實(shí)驗(yàn)裝置的結(jié)合，構(gòu)建周期短，經(jīng)測試3周后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的行為學(xué)即發(fā)生明顯改變，可以加快實(shí)驗(yàn)過程、縮短實(shí)驗(yàn)周期。

4）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其構(gòu)建的自發(fā)乳腺癌轉(zhuǎn)基因小鼠抑郁癥模型，可以廣泛用于模擬人類抑郁障礙對乳腺腫瘤發(fā)生機(jī)制的影響，同時(shí)該動(dòng)物模型，構(gòu)建過程穩(wěn)定的、可重復(fù)、操作便捷，并且可較好的模擬人乳腺癌與抑郁癥相互影響下病理的發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程。

八、發(fā)明人團(tuán)隊(duì)簡介

本發(fā)明由廣東省中醫(yī)院乳腺科主任醫(yī)師陳前軍教授團(tuán)隊(duì)研發(fā)完成。陳前軍教授，教授，主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，博士研究生導(dǎo)師。廣東省中醫(yī)院乳腺大科主任，廣東省“杰出青年醫(yī)學(xué)人才”，中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)乳腺病分會(huì)主任委員，世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)乳腺病專業(yè)委員會(huì)副會(huì)長，廣東省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)乳腺病專業(yè)委員會(huì)主任委員，廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)外科學(xué)學(xué)術(shù)帶頭人，中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)乳腺病分會(huì)主任委員，中國臨床腫瘤學(xué)會(huì)（CSCO）乳腺癌專委會(huì)委員，中國抗癌協(xié)會(huì)（CBCS）乳腺癌專委會(huì)委員，廣東省醫(yī)學(xué)會(huì)外科分會(huì)乳腺學(xué)組副組長。該團(tuán)隊(duì)包括張玉柱博士、碩士等多名專家級(jí)研究人員，具有豐富的臨床實(shí)踐及研發(fā)經(jīng)驗(yàn)。

廣東省中醫(yī)院（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院、廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院、廣東省中醫(yī)藥研修院），是三級(jí)甲等醫(yī)院，始建于1933年，是我國近代史上最早的中醫(yī)醫(yī)院之一，被譽(yù)為“南粵杏林第一家”，是國家中醫(yī)臨床研究基地建設(shè)單位，以及廣東省首批高水平醫(yī)院建設(shè)單位。該醫(yī)院是全國規(guī)模最大的中醫(yī)醫(yī)院，連續(xù)8年蟬聯(lián)全國中醫(yī)醫(yī)院競爭力排行榜榜首。2021年門診服務(wù)患者684萬人次、住院患者超15萬人次。

九、本案專利代理師經(jīng)驗(yàn)分享

抑郁癥（也稱抑郁障礙）是一種廣泛的慢性醫(yī)學(xué)疾病，可能會(huì)影響思想，情緒和身體健康。其特點(diǎn)是情緒持續(xù)低落、煩躁不安、動(dòng)機(jī)受損等，從精神動(dòng)作障礙到認(rèn)知障礙不等。抑郁還與嚴(yán)重的身體健康合并癥有關(guān)，包括心血管疾病、代謝風(fēng)險(xiǎn)因素，如肥胖、過早死亡，對社會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。抑郁癥的治療和預(yù)防仍然是公共衛(wèi)生的優(yōu)先事項(xiàng)。

乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤，是全球三大最常見的癌癥之一，女性一生中患上乳腺癌的概率高達(dá)8%-10%，嚴(yán)重威脅了現(xiàn)代女性的健康。乳腺癌小鼠模型是研究乳腺癌疾病發(fā)生機(jī)理和藥效學(xué)評(píng)價(jià)中的重要工具。一般乳腺癌小鼠模型主要分為移植瘤和原發(fā)性瘤。原發(fā)性乳腺癌模型保留有正常乳腺組織中的各類細(xì)胞和精細(xì)結(jié)構(gòu),擁有癌細(xì)胞發(fā)生和生長的微環(huán)境，這種高度的還原性使原發(fā)性乳腺癌模型無論在組織學(xué)，還是在病理學(xué)方面都擁有比移植瘤更高的擬真性，因此，原發(fā)性的乳腺癌小鼠模型成為乳腺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)理的理想模型。

然而，由于存在多種技術(shù)困難，目前尚缺乏一種可模擬抑郁癥誘發(fā)乳腺腫瘤機(jī)制的動(dòng)物模型，同時(shí)，由于目前對抑郁障礙研究所使用的動(dòng)物模型存在操作復(fù)雜、可重復(fù)性差、個(gè)體差異大、造模時(shí)間長、動(dòng)物死亡率高等缺點(diǎn)，無法將其直接應(yīng)用于模擬誘發(fā)乳腺癌的動(dòng)物模型。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種穩(wěn)定的、可重復(fù)的、操作便捷的、可模擬人類抑郁癥誘發(fā)乳腺癌病理發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程的動(dòng)物模型。

針對這一情況，本發(fā)明人團(tuán)隊(duì)研發(fā)了一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，通過操作簡便、可重復(fù)性強(qiáng)的建模方法，對試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行機(jī)械限制、使其罹患抑郁癥并結(jié)合自發(fā)乳腺癌，用來模擬研究人類的抑郁癥誘發(fā)乳腺癌的相關(guān)表征和機(jī)理；本發(fā)明還提供了一種實(shí)施該方法的束縛裝置，該裝置結(jié)構(gòu)緊湊、易于使用；同時(shí)，本發(fā)明還進(jìn)一步提供了該動(dòng)物模型在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用。

本專利涉及多個(gè)學(xué)科和技術(shù)領(lǐng)域，包括疾病醫(yī)療技術(shù)、生理病理分析、生物醫(yī)藥研發(fā)篩選、動(dòng)物模型、物理器械及效果驗(yàn)證等技術(shù)，對專利代理師的跨領(lǐng)域的專業(yè)能力、綜合水平，對醫(yī)療診斷、生物醫(yī)藥及動(dòng)物模型技術(shù)領(lǐng)域的經(jīng)驗(yàn)要求較高。我公司派出專利代理師孫明科與研發(fā)團(tuán)隊(duì)對接，多次到訪研發(fā)團(tuán)隊(duì)研發(fā)場所，進(jìn)行面對面演示、講解和交流。經(jīng)過反復(fù)多次與研發(fā)團(tuán)隊(duì)深入交流，共同分析技術(shù)問題和發(fā)明要點(diǎn)，在深度檢索和多次撰寫修改的基礎(chǔ)上，完成了本項(xiàng)發(fā)明專利的申請文件。本案專利代理師通過與研發(fā)團(tuán)隊(duì)成員密切溝通，認(rèn)真聽取發(fā)明人的構(gòu)思和技術(shù)方案，并且進(jìn)行了深入的技術(shù)挖掘，準(zhǔn)確縮短技術(shù)問題和技術(shù)效果，從而得到了本發(fā)明呈現(xiàn)的較為完善的技術(shù)方案。

本案件由于涉及疾病性狀、發(fā)病機(jī)理模擬及動(dòng)物建模、醫(yī)藥開發(fā)及篩選技術(shù)，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具有較大的社會(huì)意義，專利代理師在提交、審查意見答復(fù)、繳費(fèi)等多個(gè)環(huán)節(jié)均做了快速處理，最終使本發(fā)明按照正常審查流程，能夠使本發(fā)明在13個(gè)月的時(shí)間頒發(fā)了發(fā)明證書，為發(fā)明人團(tuán)隊(duì)盡早實(shí)施該專利技術(shù)創(chuàng)造了良好的條件。

   本專利是專利代理師與發(fā)明人團(tuán)隊(duì)密切合作完成的跨領(lǐng)域高質(zhì)量專利申請案件，雙方多次、反復(fù)討論、修改了多稿才最終定稿，發(fā)明人科研團(tuán)隊(duì)及代理師對本發(fā)明均付出了辛苦的勞動(dòng)。

本發(fā)明專利作為生物醫(yī)藥領(lǐng)域的高質(zhì)量的發(fā)明專利，與申請人布局的其他發(fā)明專利相互配合，對建模方法、建模器械、醫(yī)學(xué)應(yīng)用等進(jìn)行了合理分層、遞進(jìn)式的保護(hù)，采用快速的申請和審查答復(fù)，大幅縮短了審查時(shí)間。本發(fā)明專利快速獲得授權(quán)后，有利于該申請人對該專利技術(shù)成果進(jìn)行轉(zhuǎn)化、實(shí)施，盡早投入使用，造福廣大患者，產(chǎn)生更好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。