13個月發(fā)證：一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法、裝置及應用（廣東省中醫(yī)院）

一、發(fā)明專利案件基本信息

技術領域：生物醫(yī)藥及醫(yī)療技術

專利號：CN202110391652.2

專利名稱：一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法、裝置及應用

專利申請日： 2021-04-13

專利授權日： 2022-05-27

專利申請人：廣東省中醫(yī)院(廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院、廣東省中醫(yī)藥科學院）

發(fā)明人：陳前軍，張玉柱，梁倩怡，劉曉媛，羅天裕，李華超，張宏艷，盧海，李東梅，許銳，任黎萍

專利代理機構：廣州高炬知識產權代理有限公司

專利代理師：孫明科

二、發(fā)明證書

三、發(fā)明專利申請文件信息

申請文件：19頁，9.9萬字，附圖12

授權權利要求：9，其中獨立權利要求：2

權項結構樹：

四、合享發(fā)明專利價值度評分

五、發(fā)明內容摘要：

本發(fā)明公開了一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法、裝置及應用，該方法包括如下步驟：將小鼠置于束縛裝置內，使其不能動作，每天束縛4小時、維持12小時的光?暗循環(huán)，共持續(xù)3周或以上時間，構建得到具有抑郁障礙相關表型的自發(fā)乳腺癌轉基因小鼠抑郁障礙動物模型。本發(fā)明還公開了其束縛裝置，將該動物模型用作模擬人類乳腺癌與抑郁癥過程、及篩選診療藥物或療法。本發(fā)明構建的動物模型，具有重復性好、個體差異小、建模時間短、動物死亡率低等優(yōu)點，可廣泛應用于模擬人類抑郁癥誘發(fā)乳腺癌及相關疾病病理和診療物質的篩選與療效驗證。

六、發(fā)明摘要附圖：

本發(fā)明自發(fā)乳腺癌小鼠11周乳腺組織HE染色結果照片

七、獨立權利要求2項：

1 .一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法，其特征在于，其包括如下步驟：

（1）培育5周齡、MMTV?PyMT轉基因自發(fā)乳腺癌的小鼠，作為實驗動物，并將其分為對照組、造模組兩組；

（2）制備使小鼠發(fā)生抑郁癥的束縛裝置；

（3）將造模組小鼠在設定的障礙條件下飼養(yǎng)：將每只小鼠獨立裝入到一個室內束縛裝置內，通過機械方式使其身體壓迫在束縛裝置內、不能扭頭轉身、不能動作，每天束縛4小時，維持12小時的光?暗循環(huán)，共持續(xù)3周或以上時間，使其罹患抑郁癥；

對照組小鼠在野外自由環(huán)境下飼養(yǎng)、不被束縛，兩組其他飼養(yǎng)條件均一致；

（4）分別對造模組與對照組小鼠，進行動物行為和生理組織檢測，是否具備抑郁障礙相關表型；如造模組小鼠具有抑郁障礙相關表型，則得到抑郁癥誘發(fā)乳腺癌的動物模型。

7 .一種采用權利要求1～6之一所述方法構建的抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的應用，其特征在于，將該模型用于檢測乳腺癌與抑郁癥之間發(fā)病及病變過程的關聯(lián)性實驗。

八、本發(fā)明主要的有益效果：

1）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法，采用MMTV-PyMT轉基因小鼠為實驗動物，采用機械束縛裝置使其逐步罹患抑郁癥，結合其自發(fā)乳腺癌轉基因，可以較好的實現(xiàn)模擬人類的抑郁癥誘發(fā)乳腺癌病理發(fā)生與發(fā)展進程的過程。其構建的動物模型，具有性能穩(wěn)定、可重復性好、操作便捷、動物個體差異小、造模時間短、動物死亡率低等優(yōu)點。在實際操作中，實驗動物的應激較小，傷害較小，可以減少外傷對動物模擬發(fā)病過程的影響。

2）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法，采用的MMTV-PyMT轉基因FVB小鼠為原發(fā)性動物模型，可模擬原發(fā)性乳腺癌發(fā)病過程，其采用特定的剝離MMTV病毒，導致小鼠乳腺腫瘤的重要病毒的組織特異啟動子和增強子，來介導PyMT癌基因在乳腺中高表達，從而誘發(fā)乳腺上皮細胞中PyMT基因的表達失控，進而誘發(fā)細胞的惡性增殖，導致乳腺癌的發(fā)生；其模擬效益優(yōu)于移植性動物模型。同時，FVB小鼠容易焦慮，其自身不容易自發(fā)產生腫瘤。因此，適合于作為本發(fā)明抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建。

3）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法，通過實驗動物的選擇與實驗裝置的結合，構建周期短，經(jīng)測試3周后實驗動物的行為學即發(fā)生明顯改變，可以加快實驗過程、縮短實驗周期。

4）本發(fā)明提供抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法，其構建的自發(fā)乳腺癌轉基因小鼠抑郁癥模型，可以廣泛用于模擬人類抑郁障礙對乳腺腫瘤發(fā)生機制的影響，同時該動物模型，構建過程穩(wěn)定的、可重復、操作便捷，并且可較好的模擬人乳腺癌與抑郁癥相互影響下病理的發(fā)生與發(fā)展進程。

八、發(fā)明人團隊簡介

本發(fā)明由廣東省中醫(yī)院乳腺科主任醫(yī)師陳前軍教授團隊研發(fā)完成。陳前軍教授，教授，主任醫(yī)師，醫(yī)學博士，博士研究生導師。廣東省中醫(yī)院乳腺大科主任，廣東省“杰出青年醫(yī)學人才”，中華中醫(yī)藥學會乳腺病分會主任委員，世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會乳腺病專業(yè)委員會副會長，廣東省中醫(yī)藥學會乳腺病專業(yè)委員會主任委員，廣州中醫(yī)藥大學中醫(yī)外科學學術帶頭人，中華中醫(yī)藥學會乳腺病分會主任委員，中國臨床腫瘤學會（CSCO）乳腺癌專委會委員，中國抗癌協(xié)會（CBCS）乳腺癌專委會委員，廣東省醫(yī)學會外科分會乳腺學組副組長。該團隊包括張玉柱博士、碩士等多名專家級研究人員，具有豐富的臨床實踐及研發(fā)經(jīng)驗。

廣東省中醫(yī)院（廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院、廣東省中醫(yī)藥科學院、廣東省中醫(yī)藥研修院），是三級甲等醫(yī)院，始建于1933年，是我國近代史上最早的中醫(yī)醫(yī)院之一，被譽為“南粵杏林第一家”，是國家中醫(yī)臨床研究基地建設單位，以及廣東省首批高水平醫(yī)院建設單位。該醫(yī)院是全國規(guī)模最大的中醫(yī)醫(yī)院，連續(xù)8年蟬聯(lián)全國中醫(yī)醫(yī)院競爭力排行榜榜首。2021年門診服務患者684萬人次、住院患者超15萬人次。

九、本案專利代理師經(jīng)驗分享

抑郁癥（也稱抑郁障礙）是一種廣泛的慢性醫(yī)學疾病，可能會影響思想，情緒和身體健康。其特點是情緒持續(xù)低落、煩躁不安、動機受損等，從精神動作障礙到認知障礙不等。抑郁還與嚴重的身體健康合并癥有關，包括心血管疾病、代謝風險因素，如肥胖、過早死亡，對社會造成巨大的經(jīng)濟損失。抑郁癥的治療和預防仍然是公共衛(wèi)生的優(yōu)先事項。

乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤，是全球三大最常見的癌癥之一，女性一生中患上乳腺癌的概率高達8%-10%，嚴重威脅了現(xiàn)代女性的健康。乳腺癌小鼠模型是研究乳腺癌疾病發(fā)生機理和藥效學評價中的重要工具。一般乳腺癌小鼠模型主要分為移植瘤和原發(fā)性瘤。原發(fā)性乳腺癌模型保留有正常乳腺組織中的各類細胞和精細結構,擁有癌細胞發(fā)生和生長的微環(huán)境，這種高度的還原性使原發(fā)性乳腺癌模型無論在組織學，還是在病理學方面都擁有比移植瘤更高的擬真性，因此，原發(fā)性的乳腺癌小鼠模型成為乳腺癌發(fā)生和轉移機理的理想模型。

然而，由于存在多種技術困難，目前尚缺乏一種可模擬抑郁癥誘發(fā)乳腺腫瘤機制的動物模型，同時，由于目前對抑郁障礙研究所使用的動物模型存在操作復雜、可重復性差、個體差異大、造模時間長、動物死亡率高等缺點，無法將其直接應用于模擬誘發(fā)乳腺癌的動物模型。因此，本領域迫切需要開發(fā)一種穩(wěn)定的、可重復的、操作便捷的、可模擬人類抑郁癥誘發(fā)乳腺癌病理發(fā)生與發(fā)展進程的動物模型。

針對這一情況，本發(fā)明人團隊研發(fā)了一種抑郁癥誘發(fā)乳腺癌動物模型的構建方法，通過操作簡便、可重復性強的建模方法，對試驗動物進行機械限制、使其罹患抑郁癥并結合自發(fā)乳腺癌，用來模擬研究人類的抑郁癥誘發(fā)乳腺癌的相關表征和機理；本發(fā)明還提供了一種實施該方法的束縛裝置，該裝置結構緊湊、易于使用；同時，本發(fā)明還進一步提供了該動物模型在醫(yī)療領域的應用。

本專利涉及多個學科和技術領域，包括疾病醫(yī)療技術、生理病理分析、生物醫(yī)藥研發(fā)篩選、動物模型、物理器械及效果驗證等技術，對專利代理師的跨領域的專業(yè)能力、綜合水平，對醫(yī)療診斷、生物醫(yī)藥及動物模型技術領域的經(jīng)驗要求較高。我公司派出專利代理師孫明科與研發(fā)團隊對接，多次到訪研發(fā)團隊研發(fā)場所，進行面對面演示、講解和交流。經(jīng)過反復多次與研發(fā)團隊深入交流，共同分析技術問題和發(fā)明要點，在深度檢索和多次撰寫修改的基礎上，完成了本項發(fā)明專利的申請文件。本案專利代理師通過與研發(fā)團隊成員密切溝通，認真聽取發(fā)明人的構思和技術方案，并且進行了深入的技術挖掘，準確縮短技術問題和技術效果，從而得到了本發(fā)明呈現(xiàn)的較為完善的技術方案。

本案件由于涉及疾病性狀、發(fā)病機理模擬及動物建模、醫(yī)藥開發(fā)及篩選技術，屬于生物醫(yī)藥技術領域，具有較大的社會意義，專利代理師在提交、審查意見答復、繳費等多個環(huán)節(jié)均做了快速處理，最終使本發(fā)明按照正常審查流程，能夠使本發(fā)明在13個月的時間頒發(fā)了發(fā)明證書，為發(fā)明人團隊盡早實施該專利技術創(chuàng)造了良好的條件。

本專利是專利代理師與發(fā)明人團隊密切合作完成的跨領域高質量專利申請案件，雙方多次、反復討論、修改了多稿才最終定稿，發(fā)明人科研團隊及代理師對本發(fā)明均付出了辛苦的勞動。

本發(fā)明專利作為生物醫(yī)藥領域的高質量的發(fā)明專利，與申請人布局的其他發(fā)明專利相互配合，對建模方法、建模器械、醫(yī)學應用等進行了合理分層、遞進式的保護，采用快速的申請和審查答復，大幅縮短了審查時間。本發(fā)明專利快速獲得授權后，有利于該申請人對該專利技術成果進行轉化、實施，盡早投入使用，造福廣大患者，產生更好的社會和經(jīng)濟效益。